Colonnes HPLC HALO® pour la UHPLC à pression « normale »
Compatibles avec les appareils UHPLC et HPLC classiques

La colonne HALO® permet une séparation rapide comparable à celle d’une UHPLC, mais à pression « normale » de moins de 400 bars et sur des appareils HPLC conventionnels.

Une séparation plus rapide est obtenue par une colonne remplie de particules plus fines. Ceci réduit le chemin de diffusion à travers les pores et minimise ainsi l’élargissement des pics. Par conséquent, des débits plus rapides deviennent possibles ce qui mène à un gain en temps d’analyse. Malheureusement, les particules fines font augmenter la pression de manière à ce que pour les colonnes « rapides » remplies de particules de 1.7 µm, on a normalement besoins des appareils UHPLC spéciaux.

La colonne HALO® se base sur la technologie dénommée « fused core ».

A la surface d’un noyau solide en silice d’un diamètre de 1.7 µm est « soudée » une couche poreuse de 0.5 µm. Le chemin de diffusion plus court de 0.5 µm seulement pour les colonnes remplies de particules HALO® – comparé à 1.5 µm pour les colonnes remplies de particules totalement poreuses de 3 µm - réduit la dispersion axiale de l’échantillon et minimise l’élargissement des pics

Ceci permet des débits plus rapides et grâce à la force de séparation plus performante, la colonne HALO® peut être utilisée soit pour des analyses plus rapides soit pour une meilleure séparation

Le chemin de diffusion plus court de la colonne HALO® réduit la dispersion axiale.
 
Grâce au chemin de diffusion plus court, les avantages de la colonne HALO® deviennent encore plus évidents si des échantillons avec de plus grandes molécules sont séparés avec des débits plus rapides.
   

Les colonnes HALO® disposent d’une plus haute efficacité de séparation

Comparaison de la contre-pression des colonnes

Les courbes de Van Deemter permettent de bien comparer l’efficacité des différentes colonnes HPLC. La comparaison ci-dessus démontre que les colonnes HALO® sont plus efficaces que les colonnes remplies de particules de 5 µm ou de 3.5 µm. De plus, elles peuvent être utilisées – sans perte de précision de séparation – à de plus grande vitesse linéaire de la phase mobile. La plupart des systèmes HPLC supportent une pression maximale de 400 bars ou moins. Plus la taille de particules du matériel d’emballage diminue, plus la contre-pression de la colonne augmente. Afin de pouvoir utiliser les colonnes remplies de particules de ˂ 2 µm au débit optimal, une pression au-dessus de 400 bars est normalement nécessaire. Ainsi, pour obtenir une performance optimale de la colonne, l’achat d’un nouvel appareil « ultra pression » coûteux devient nécessaire. Par contre, les colonnes HALO® peuvent être utilisées sur des installations HPLC conventionnelles, bien que leur contre-pression soit légèrement supérieure par rapport aux colonnes remplies de particules de 3.5 µm.
   
L’asymétrie de pics (Peak Tailing) due aux éléments traces métalliques ou aux groupes silanole est quasiment inexistante pour les colonnes HALO®. L’exemple ci-dessous montre une forme de pic excellente, qui était obtenue lors de la séparation de bases et d’acides par une colonne HALO®. Les conditions pour la séparation des bases ont été choisies de manière à encourager une interférence potentielle de silanole. La forme de pic excellente d’amitriptyline résultant sous ces conditions est remarquable.

Échantillon:
1. uracile
2. butyle parabène
3. propranolole
4. naphtalène
5. acenaphtène
6. amitriptyline

Colonne: HALO® C8, 4.6 x 50 mm

Phase mobile : 75% méthanole, 25% 25 mM phosphate de potassium, pH 7.0

Débit : 1.5 ml/min.

Température : ambiante (24 °C)

Pression : 3,000 psi, 205 bar

   

Brève instruction pour adapter la méthode conventionnelle à la colonne HALO®

Afin d’adapter les applications exécutées sur du matériel de 5 µm à celles sur une colonne HALO®, le débit doit être ajusté. Sinon, la contre-pression deviendrait trop grande. Comment bien adapter le débit est décrit dans cette brochure de conversion.

pdf 545 KB

   

Particules UHPLC HALO®
• taille des particules: 2,7 μm - à la surface d’un noyau solide est «soudée» une couche poreuse de 0.5 µm
• en silice ultra-pure de «type B»
• particules de forme sphérique
• taille des pores 90 Å
• surface 150 m2/g

 

Colonnes UHPLC HALO® avec phase C18 & C8

Rapport d’évaluation colonne HALO® C18 - pdf 1.1 MB

Idéale pour une vaste gamme d’analytes polaires. La séparation se fait en premier lieu par interaction hydrophobe et en fonction des différentes hydrophobicité des analytes.

C18 - rétention des analytes polaires et des analytes modérément polaires
C8 - sélectivité similaire qu’avec une colonne C18, mais rétention plus modérée

   

Colonnes UHPLC HALO® avec phase Phenyl-Hexyl

La séparation s’effectue aussi bien par interaction hydrophobe que par interaction π-π. Rétention et sélectivité augmentées pour les analytes aromatiques et insaturées, spécialement pour les groupes attracteurs d’électrons et les halogènes. Compatible avec les phases mobiles aqueuses.

   

Colonnes UHPLC HALO® avec phase RP-Amide

Phase HALO® RP-Amide pour la séparation d’analytes qui forment des liaisons hydrogènes faibles avec les amides. Cette phase offre une alternative à la phase C18 pour les analytes qui sont difficilement séparables moyennant ladite phase. Généralement, on peut retenir que sur une colonne HALO® RP-Amide, les analytes acides sont retenus un peu plus fortement, les basiques un peu moins fortement et les analytes neutres à peu près de la même manière que sur une colonne HALO® 18.

   

Colonnes UHPLC HALO® avec phase PFP

La séparation se fait en fonction des différents types et degrés d’interaction des analytes, y-inclus les interactions hydrophobes, π-π, dipôles-dipôles et les liaisons hydrogènes. S’utilise également en mode HILIC pour les phases mobiles contenant un taux d’acétonitrile accru (80%). Compatible avec les phases mobiles fortement aqueuses.

   

Colonnes UHPLC HALO® avec phase ES-CN

Permet pour les analytes une forte interaction dipôle-dipôle et une faible interaction hydrophobe. Idéale pour la RP, la HILIC et la chromatographie à phases normales. Equilibrage très rapide à faible ressuage pour les applications en LC-MS ultra-rapides. Bonne stabilité et performance comparées aux phases CN conventionnelles grâce à la liaison stable moyennant des ligands protégés stériquement, espécialement pour les valeurs de pH basses (1-4).

   

Colonnes UHPLC HALO® avec phase Penta-HILIC

La Penta HILIC a été développée spécifiquement pour la chromatographie à interaction hydrophile (HILIC).La phase stationnaire de la HALO® Penta-HILIC est un ligand hautement polaire. A la silice sont liés cinq groups hydroxyles. Le mécanisme de rétention est une combinaison entre une interaction hydrophile, un échange d’ions et une interaction de liaison hydrophobe modérée. Contrairement à la chromatographie RP, l’eau est le moyen d’élution le plus fort pour la chromatographie HILIC. Cela veut dire : en phase mobile, les gradients commencent normalement avec un niveau d’acétonitrile élevé (> 70%) et terminent avec un niveau d’eau / de tampon élevé.

La phase Penta HILIC est recommandée pour les applications LC-MS et la séparation des analytes hautement polaires pour lesquels la rétention par intermédiaire de RP ne serait que modérée.

   

Colonnes UHPLC HALO® avec phase HILIC

La HALO® HILIC est une phase silice pure sans liaisons. Utilisable aussi bien pour la chromatographie à phases normales que pour la chromatographie à interaction hydrophile (HILIC). Si on utilise cette colonne pour la HILIC, elle se prête à des applications similaires décrites ci-dessus sous la rubrique Penta HILIC. Par contre, la sélectivité peut différer légèrement.

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