Colonnes HPLC HALO®-5  

La colonne HALO®-5 se base comme les colonnes HALO® 2.7 µm sur la technologie dénommé « fused core ». Comparativement aux colonnes HPLC standard remplies avec des particules de 5 µm totalement poreuses, les colonnes HALO®-5 se caractérisent de la manière suivante:

haute efficacité et débit rapide comme avec une colonne UHPLC remplie de particules  de ˂ 3 µm

durée de vie et facilité d’utilisation comparable à une colonne HPLC remplie de particules de 5 µm

faible contre-pression, ce qui permet leur utilisation sur les instruments HPLC « classiques »

A l’origine, la colonne HALO® a été conçue et fabriquée comme colonne UHPLC. De nos jours, la technologie « fused core », qui était à l’origine du succès des colonnes HALO® UHPLC, est utilisée pour la nouvelle génération des colonnes HPLC standard à excellente performance.

La UHPLC se développe rapidement, mais les coûts et la complexité continuent à représenter un facteur à ne pas sous-estimer. De plus, un très grand nombre d’instruments conventionnels sont toujours en utilisation de manière à ce que la HPLC dans le sens classique du terme va rester la méthode de séparation la plus répandue pour la chromatographie liquide dans les années à venir. Pourtant, pour pouvoir répondre au besoin d’une plus haute performance et d’une séparation augmentée, la HALO®-5 basée sur la technologie de « fused core » a été développée.

Les particules «fused core» sont constituées d’une couche poreuse soudée à la surface d’un noyau solide. La petite taille des particules à distribution extrêmement serrée et le chemin de diffusion très court de ces particules HALO® poreuses réduisent la dispersion axiale de l’échantillon et minimisent l'élargissement des pics.

   
HALO®-5 : séparation plus rapide, résolution plus élevée  
   
HALO®-5: nombre de plateaux le plus élevé par unité de contre-pression  

Il est connu que les colonnes remplies avec de grandes particules génèrent des nombres de plateaux théoriques plus élevés par unité de contre-pression que les colonnes remplis de particules plus petites.
Le nombre de plateaux par unité de contre-pression est pour la colonne HALO®-5 significativement plus élevé que pour les colonnes conventionnelles remplies de particules de 5 µm. Ainsi, la colonne HALO®-5 est parfaitement convenable si des composés complexes, qui demandent pour leur séparation un nombre de plateaux théoriques élevé, doivent être séparés ou si la séparation doit être effectuée par un instrument conventionnel à contre-pression limitée.

   
Plot comparaison cinétique  
Une des caractéristiques les plus importantes des particules « fused core » est que comparativement aux particules totalement poreuses (dp90/dp10 ~ 1.5) la distribution des tailles de particules (dp90/dp10 ˂ 1.15) est limitée. Ceci et la haute densité des particules « fused core » facilitent le remplissage des colonnes avec une hauteur de plateau « h » extrêmement réduite. Jusqu’à présent, on avait assumé que pour les colonnes remplies, la hauteur de plateau ne peut pas être réduite en dessous de 2. Du fait, seulement très peu de colonnes disponibles sur le marché avaient même atteint une valeur en dessus de 2.5. La colonne HALO®-5 dispose typiquement d’une valeur « h » de 1.3. Ceci explique d’une part pourquoi quant à l’efficacité et à la performance de séparation les colonnes HALO®-5 dépassent largement les colonnes HPLC standard remplies avec des particules de 5 µm totalement poreuses. D’autre part, il devient évident pourquoi une séparation similaire à celle d’une colonne 3 µm mais à une pression à moitié plus faible peut être atteinte.
   

Specifications HALO®-5
• à la surface d’un noyau solide est «soudée» une couche poreuse de 0.6 µm
• en silice ultra-pure de «type B»
• valeurs de pH: 2 - 9, température max. 60 °C pression max. 9000 psi/600 bars
• taille des pores 90 Å
• surface 90 m2/g (équivalent à 150 - 200 m2/g de particules totalement poreuses)

   

Idéale pour une vaste gamme d’analytes polaires. La séparation se fait en premier lieu par interaction hydrophobe et en fonction des différentes hydrophobicité des analytes.

C18 – rétention des analytes polaires et des analytes modérément polaires

C8 – sélectivité similaire qu’avec une colonne C18, mais rétention plus modérée

La séparation s’effectue aussi bien par interaction hydrophobe que par interaction π-π. Rétention et sélectivité augmentées pour les analytes aromatiques et insaturées, spécialement pour les groupes attracteurs d’électrons et les halogènes. Compatible avec les phases mobiles aqueuses.

La séparation se fait en fonction des différents types et degrés d’interaction des analytes, y-inclus les interactions hydrophobes, π-π, dipôles-dipôles et les liaisons hydrogènes. S’utilise également en mode HILIC pour les phases mobiles contenant un taux d’acétonitrile accru (80%). Compatible avec les phases mobiles fortement aqueuses.

Permet pour les analytes une forte interaction dipôle-dipôle et une faible interaction hydrophobe. Idéale pour la RP, la HILIC et la chromatographie à phases normales. Equilibrage très rapide à faible ressuage pour les applications en LC-MS ultra-rapides. Bonne stabilité et performance comparées aux phases CN conventionnelles grâce à la liaison stable moyennant des ligands protégés stériquement, espécialement pour les valeurs de pH basses (1-4).

La Penta HILIC a été développée spécifiquement pour la chromatographie à interaction hydrophile (HILIC). La phase stationnaire de la HALO® Penta-HILIC hautement polaire. A la silice sont liés cinq groups hydroxyles. Le mécanisme de rétention est une combinaison entre une interaction hydrophile, un échange d’ions et une interaction de liaison hydrophobe modérée. Contrairement à la chromatographie RP, l’eau est le moyen d’élution le plus fort pour la chromatographie HILIC. Cela veut dire : en phase mobile, les gradients commencent normalement avec un niveau d’acétonitrile élevé (> 70%) et terminent avec un niveau d’eau / de tampon élevé.

La phase Penta HILIC est recommandée pour les applications LC-MS et la séparation des analytes hautement polaires pour lesquels la rétention par intermédiaire de RP ne serait que modérée.

La HALO®-5 HILIC est une phase silice pure sans liaisons. Utilisable aussi bien pour la chromatographie à phases normales que pour la chromatographie à interaction hydrophile (HILIC).

Si on utilise cette colonne pour la HILIC, elle se prête à des applications similaires décrites ci-dessus sous la rubrique Penta HILIC. Par contre, la sélectivité peut différer légèrement.

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